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Cpsidas vacas del virus de la enfermedad hemorrgica del conejo como plataforma para la induccin de respuesta humoral neutralizante y protectora frente a eptopos B heterlogos

by Mogedano Noelia Moreno

Las VLPs (virus-like particles) son ensamblados macromoleculares constituidos por protenasestructurales virales, que carecen de material gentico y pueden someterse a modificacinqumica o mediante ingeniera gentica, para ser utilizadas como plataformas de presentacinmultimrica de antgenos forneos. En esta tesis se describe la generacin y caracterizacin deVLPs quimricas derivadas del virus de la enfermedad hemorrgica del conejo (RHDV)incorporando eptopos B heterlogos. El virus RHDV es el prototipo del gnero Lagovirus,perteneciente a la familia Caliciviridae. Posee una cpsida formada por 180 copias de la protenaestructural (VP60). Con el fin de evaluar la capacidad de las VLPs quimricas de RHDV para inducirrespuesta humoral especfica y protectora frente a antgenos forneos, seleccionamos doseptopos B diferentes: un eptopo neutralizante, derivado de la cpsida del calicivirus felino (FCV),recientemente identificado por nuestro grupo, y un eptopo muy bien caracterizadocorrespondiente al dominio extracelular de la protena M2 del virus de la gripe (M2e). Seobtuvieron VLPs quimricas de RHDV con eptopos heterlogos insertados en tres localizacionesdistintas de la protenaVP60 y en diferente nmero de copias por sitio de insercin. Lainmunogenicidad de las VLPs quimricas se evalu en el modelo murino. Los resultados obtenidosindicaron que las VLPs quimricas de RHDV son capaces de inducir respuesta humoral especfica yprotectora frente a los eptopos B forneos, demostrada tanto por la neutralizacin in vitro, comopor la proteccin in vivo inducida frente a un desafo viral letal.Adems, mediante la realizacin de ensayos de PEPSCAN, en esta tesis se han identificado tresregiones lineales inmunodominantes en el subdominio P2 de la protena VP60. Una de dichasregiones presenta propiedades estructurales potencialmente adecuadas para constituir un nuevositio de insercin de eptopos B heterlogos.Los resultados presentados demuestran: (i) que se pueden insertar eptopos B forneos en almenos tres localizaciones diferentes, incluso simultneamente, sin afectar la capacidad de laprotena VP60 de autoensamblarse en VLPs, (ii) que las VLPs de RHDV toleran la insercin de almenos tres copias en tndem de un eptopo forneo (62 aa) en el bucle expuesto L1, dos copias(42 aa) en el extremo N-terminal o una copia (22 aa) en el extremo C-terminal, (iii) que elsubdominio P2 contiene tres sitios lineales inmunodominantes conservados.En conjunto, los resultados obtenidos en esta tesis amplan el potencial de las VLPs de RHDVcomo plataforma para el desarrollo de nuevas vacunas, demostrando su capacidad para inducirrespuestas humorales potentes y protectoras frente a eptopos B heterlogos insertos en ellas.Advisors/Committee Members: Blanco Lavilla, Esther (dir.), Brcena del Riego, Juan (dir.), UAM. Departamento de Biologa Molecular, Centro de Investigacin de Sanidad Animal (CISA-INIA).